【Verwendungszweck】

Das Kit ist eine TaqMan-Sonden-Echtzeit-Fluoreszenz-PCR zum qualitativen Nachweis von ORF1ab, N-Gen-Nukleinsäure von 2019-nCoV in Rachenabstrichen, Sputum bei Patienten mit Verdacht auf Lungenentzündungssymptome und Clustering-Fällen.

Die Testergebnisse dienen nur als klinische Referenz und können nicht als einziger Maßstab für die klinische Diagnose angesehen werden. Es wird empfohlen, eine manifeste Analyse in Bezug auf klinische Symptome und andere Laborergebnisse durchzuführen.

Die Bediener sollten über Erfahrung in der Berufsausbildung in Genamplifikation oder molekularbiologischen Methodentests verfügen und über entsprechende Qualifikationen für den Laborbetrieb verfügen. Das Labor sollte über angemessene biologische Sicherheitsvorkehrungen und Schutzverfahren verfügen.

【Testprinzip】

In diesem Kit sind Primer und Sonden für die konservierten bzw. spezifischen Regionen des ORF1ab, N von 2019-nCoV konzipiert. Fluoreszenz-PCR wird verwendet, um virale RNA nach Nukleinsäurereinigung von Proben-RNA nachzuweisen.

Dieses Testkit verwendet Echtzeit-Fluoreszenz-PCR-Technologie. Während der PCR-Amplifikation bindet die Sonde an die Vorlage, und die 5'-End-Reportergruppe der Sonde wird dadurch durch das Taq-Enzym (5'→3'-Exonuklease-Aktivität) gespalten sich von der Löschgruppe wegbewegt, um ein Fluoreszenzsignal zu erzeugen. Die Echtzeit-Amplifikationskurve wird automatisch basierend auf dem erkannten Fluoreszenzsignal gezeichnet und der Ct-Wert der Probe wird berechnet (Die Anzahl der Zyklen, die auftreten, wenn das Fluoreszenzsignal in jedem Reaktionsröhrchen den eingestellten Schwellenwert erreicht). FAM-, VIC- und Texas-Rot-Fluorophore werden verwendet, um ORF1ab-Gen-, N-Gensonden in Reaktionslösung zu markieren. Durch die Verwendung eines Tests kann ein qualitativer Nachweis der beiden oben genannten Gene von 2019-nCoV gleichzeitig durchgeführt werden.

Um das falsch negative Ergebnis zu vermeiden, wird das Kit mit einer internen Kontrolle (IC) geliefert, die mit einer Cy5-Fluoreszenzgruppe markiert ist, die zur Überwachung des Extraktionsverfahrens und der Reaktionslösung verwendet werden könnte.

【Hauptbestandteile】

Notiz¹: Die verschiedenen Chargen der Komponenten können nicht umgetauscht werden.

Notiz²: Das Testkit enthält kein Nukleinsäure-Extraktionsreagenz, bereiten Sie das Reagenz bitte vor Gebrauch vor.

1. Probenhandhabung

Fügen Sie 10 μl interne Kontrolle zu 200 μl Positivkontrolle bzw. Negativkontrolle hinzu, um die Nukleinsäureextraktion durchzuführen.

2. Vorbereitung der Reagenzien:

Systemvorbereitung: Nehmen Sie den vorinstallierten Nukleinsäure-Amplifikations-Gefriertrockner, öffnen Sie anschließend den Folienbeutel und zentrifugieren Sie ihn sofort. Die Probenmenge jedes Tests sollte ein Vielfaches von 8 sein und eine Positivkontrolle und eine Negativkontrolle enthalten. Geben Sie 35 μl nukleasefreies Wasser in jedes Reaktionsröhrchen.

3. Beispielladen:

Fügen Sie 5 μl der zu testenden Nukleinsäure hinzu, positive Kontrolle, negative Kontrolle, dass das gesamte Reaktionsvolumen 40 μl in der zugewiesenen Reaktionslösung beträgt, da keine feine Mischung erforderlich ist, und schließen Sie einfach den Deckel des PCR-Reaktionsröhrchens, zentrifugieren Sie die Flüssigkeit in der Röhrchenwand auf dem Boden des Röhrchens, führen Sie so die PCR-Amplifikation durch.

Nach Überprüfung wird geschätzt, dass die Zugabe von 5 μl-10 μl Paraffinöl in das PCR-System das PCR-Ergebnis nicht beeinflusst, aber eine Kontamination und Flüssigkeitsverdampfung verhindert.